网上有关“凯氏定氮法如何测定蛋白质的含量？”话题很是火热，小编也是针对凯氏定氮法如何测定蛋白质的含量？寻找了一些与之相关的一些信息进行分析 ，如果能碰巧解决你现在面临的问题 ，希望能够帮助到您 。
（一）消化
1、准备6个凯氏烧瓶，标号 。1 、2 、3号烧瓶中分别加入适当浓度的蛋白溶液1.0mL ，样品要加到烧瓶底部 ，切勿沾在瓶口及瓶颈上。再依次加入硫酸钾-硫酸铜接触剂0.3g，浓硫酸2.0mL ，30%过氧化氢1.0mL 。4、5 、6号烧瓶作为空白对照 ，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，对样品测定进行校正 。4 、5、6号烧瓶中加入蒸馏水1.0mL代替样液 ，其余所加试剂与1 、2 、3号烧瓶相同。2、将加好试剂的各烧瓶放置消化架上 ，接好抽气装置 。先用微火加热煮沸，此时烧瓶内物质炭化变黑，并产生大量泡沫 ，务必注意防止气泡冲出管口 。待泡沫消失停止产生后 ，加大火力，保持瓶内液体微沸 ，至溶液澄清后 ，再继续加热使消化液微沸15min。在消化过程中要随时转动烧瓶，以使内壁粘着物质均能流入底部 ，以保证样品完全消化 。消化时放出的气体内含SO2 ，具有强烈刺激性，因此自始自终应打开抽水泵将气体抽入自来水排出 。整个消化过程均应在通风橱中进行。消化完全后 ，关闭火焰 ，使烧瓶冷却至室温。
（二）蒸馏和吸收
蒸馏和吸收是在微量凯氏定氮仪内进行的 。凯氏定氮蒸馏装置种类甚多，大体上都由蒸气发生 、氨的蒸馏和氨的吸收三部分组成 。 1 、仪器的洗涤 仪器安装前 ，各部件需经一般方法洗涤干净 ，所用橡皮管、塞须浸在10%NaOH溶液中，煮约10min，水洗、水煮10min ，再水洗数次 ，然后安装并固定在一只铁架台上。仪器使用前，微量全部管道都须经水蒸气洗涤 ，以除去管道内可能残留的氨 ，正在使用的仪器，每次测样前 ，蒸气洗涤5min即可 。较长时间未使用的仪器 ，重复蒸气洗涤，不得少于三次 ，并检查仪器是否正常 。仔细检查各个连接处 ，保证不漏气。 首先在蒸气发生器中加约2/3体积蒸馏水，加入数滴硫酸使其保持酸性 ，以避免水中的氨被蒸出而影响结果 ，并放入少许沸石（或毛细管等），以防爆沸 。沿小玻杯壁加入蒸馏水约20mL让水经插管流入反应室，但玻杯内的水不要放光 ，塞上棒状玻塞 ，保持水封，防止漏气 。蒸气发生后 ，立即关闭废液排放管上的开关 ，使蒸气只能进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾 ，蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却 ，在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。从定氮球发烫开始计时，连续蒸煮5min ，然后移开煤气灯 。冲洗完毕 ，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接橡胶管，由于气体冷却压力降低 ，反应室内废液自动抽到反应室外壳中 ，打开废液排出口夹子放出废液 。如此清洗2～3次，再在冷凝管下换放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶使冷凝管下口完全浸没在溶液中，蒸馏1～2min ，观察锥形瓶内的溶液是否变色。如不变色 ，表示蒸馏装置内部已洗干净 。移去锥形瓶，再蒸馏1～2min ，用蒸馏水冲洗冷凝器下口 ，关闭煤气灯，仪器即可供测样品使用 。 2 、无机氮标准样品的蒸馏吸收 由于定氮操作繁琐 ，为了熟悉蒸馏和滴定的操作技术 ，初学者宜先用无机氮标准样品进行反复练习，再进行有机氮未知样品的测定。常用巳知浓度的标准硫酸铵测试三次。 取洁净的100mL锥形瓶五只 ，依次加入2%硼酸溶液20mL ，次甲基蓝-甲基红混合指示剂（呈紫红色）3～4滴，盖好瓶口待用 。取其中一只锥形瓶承接在冷凝管下端 ，并使冷凝管的出口浸没在溶液中 。注意：在此操作之前必须先打开收集器活塞 ，以免锥形瓶内液体倒吸。准确吸取2mL硫酸铵标准液加到玻杯中，小心提起棒状玻塞使硫酸铵溶液慢慢流入蒸馏瓶中，用少量蒸馏水冲洗小玻杯3次 ，一并放人蒸馏瓶中 。然后用量筒向小玻杯中加入10 mL 30%NaOH溶液 ，使碱液慢慢流入蒸馏瓶中，在碱液尚未完全流入时 ，将棒状玻塞盖紧 。向小玻杯中加约5mL蒸馏水 ，再慢慢打开玻塞，使一半水流入蒸馏瓶 ，一半留在小玻杯中作水封。关闭收集器活塞 ，加热蒸气发生器，进行蒸馏 。锥形瓶中的硼酸-指示剂混合液由于吸收了氨 ，由紫红色变成绿色 。自变色时起 ，再蒸馏3～5min，移动锥形瓶使瓶内液面离开冷凝管下口约lcm ，并用少量蒸馏水冲洗冷凝管下口 ，再继续蒸馏1min，移开锥形瓶，盖好 ，准备滴定。 在一次蒸馏完毕后 ，移去煤气灯，夹紧蒸气发生器与收集器间的橡胶管 ，排除反应完毕的废液 ，用水冲洗小玻杯几次，并将废液排除 。如此反复冲洗干净后 ，即可进行下一个样品的蒸馏 。按以上方法用标准硫酸铵再做两次。另取2mL蒸馏水代替标准硫酸铵进行空白测定二次 。将各次蒸馏的锥形瓶一起滴定 。 3 、未知样品及空白的蒸馏吸收 将消化好的蛋白样品三支 ，空白对照液三支，依次作蒸馏吸收。 加5mL热的蒸馏水至消化好的样品或空白对照液中 ，通过小玻杯加到反应室中 ，再用热蒸馏水洗涤小玻杯3次，每次用水量约3mL ，洗涤液一并倒入反应室内。其余操作按标准硫酸铵的蒸馏进行 。 由于消化液内硫酸钾浓度高而呈粘稠状 ，不易从凯氏烧瓶内倒出，必须加入热蒸馏水5 mL稀释之，如果有结晶析出 ，必须微热溶解 ，趁热加入玻杯，使其流入反应室 。此外 ，还应当注意趁仪器洗涤尚未完全冷却时立即加入样品或空白对照液 ，否则消化液通过冷却的管道容易析出结晶，造成堵塞。
（三）滴定
样品和空白蒸馏完毕后 ，一起进行滴定 。打开接受瓶盖 ，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的标准盐酸溶液进行滴定 。待滴至瓶内溶液呈暗灰色时，用蒸馏水将锥形瓶内壁四周淋洗一次。若振摇后复现绿色 ，应再小心滴入标准盐酸溶液半滴 ，振摇观察瓶内溶液颜色变化，暗灰色在一二分钟内不变 ，当视为到达滴定终点 。若呈粉红色 ，表明已超越滴定终点，可在已滴定耗用的标准盐酸溶液用量中减去0.02mL，每组样品的定氮终点颜色必须完全一致 。空白对照液接受瓶内的溶液颜色不变或略有变化尚未出现绿色 ，可以不滴定。记录每次滴定耗用标准盐酸溶液毫升数 ，供计算用 。
关于“凯氏定氮法如何测定蛋白质的含量？ ”这个话题的介绍，今天小编就给大家分享完了 ，如果对你有所帮助请保持对本站的关注！
本文来自作者[素羚]投稿，不代表万应堂立场，如若转载，请注明出处：http://www.hnwytyy.com/wanyingtang/5995.html
评论列表（3条）
我是万应堂的签约作者“素羚”
本文概览：网上有关“凯氏定氮法如何测定蛋白质的含量？”话题很是火热，小编也是针对凯氏定氮法如何测定蛋白质的含量？寻找了一些与之相关的一些信息进行分析，如果能碰巧解决你现在面临的问题，希望...
文章不错《凯氏定氮法如何测定蛋白质的含量？》内容很有帮助